Оптимизация метода очистки рекомбинантного фактора роста тромбоцитов человека rhPDGF-BB, полученного в метилотрофных дрожжах Pichia pastoris

Обложка

Цитировать

Полный текст

Открытый доступ Открытый доступ
Доступ закрыт Доступ предоставлен
Доступ закрыт Доступ платный или только для подписчиков

Аннотация

Рекомбинантный тромбоцитарный фактор роста человека rhPDGF-BB является одним из важнейших цитокинов, одобренных для медицинского использования. Препарат, известный под международным непатентованным названием “бекаплермин”, доказал свою эффективность при лечении нейропатических язв, ожогов и травм периодонта (в сочетании с остеокондуктивной матрицей). В исследовании проанализированы способы выделения и очистки rhPDGF-BB и предложена оптимизированная методика, позволяющая получать высокоочищенный rhPDGF-BB из культуральной жидкости метилотрофных дрожжей Pichia pastoris – продуцента rhPDGF-BB. Предложен простой и быстрый метод хроматографической очистки, позволяющий получать rhPDGF-BB чистотой >98% согласно электрофорезу в ПААГ, с содержанием хозяйских белков (HCP) 33 ± 4 нг/мг белка. Эффективная концентрация пролиферативной активности выделенного по оптимизированной методике rhPDGF-BB составляла 5.02 ± 2.64 нг/мл, что сопоставимо с коммерчески доступными аналогами. Разработанная методика может быть использована для получения в промышленности.

Об авторах

А.-А. В. Мистерова

Вятский государственный университет

Автор, ответственный за переписку.
Email: usr21438@vyatsu.ru
Россия, 610000, Киров

В. А. Чичерин

Вятский государственный университет

Email: usr21438@vyatsu.ru
Россия, 610000, Киров

А. С. Герасимов

Вятский государственный университет

Email: usr21438@vyatsu.ru
Россия, 610000, Киров

Список литературы

  1. Heldin C.H., Westermark B. // Physiol. Rev. 1999. V. 79. № 4. P. 1283–1316.
  2. Fu X., Cheng B. Regenerative Medicine in China. / Ed. X. Fu. Singapore: Springer, 2021. 485 p.
  3. Blume P., Bowlby M., Schmidt B., Donegan R. // Chronic Wound Care Management and Research. 2014. V. 1. P. 11–14.
  4. Kaigler D., Avila G., Wisner-Lynch L., Nevins M.L., Nevins M., Rasperini G. et al. // Expert Opin. Biol. Ther. 2011. V. 11. № 3. P. 375–380.
  5. Younger A., Penner M., Montijo H.E. // Foot Ankle Clin. 2016. V. 21. № 4. P. 771–776.
  6. Patrikoski M., Juntunen M., Boucher S., Campbell A., Vemuri M.C., Mannerstrom B. et al. // Stem Cell Res. Ther. 2013. V. 4. № 2. https://doi.org/10.1186/scrt175
  7. Oefner C., D’Arcy A., Winkler F.K., Eggimann B., Hosang M. // EMBO J. 1992. V. 11. № 11. P. 3921–3926.
  8. Babavalian H., Latifi A.M., Shokrgozar M.A. et al. // Cellular and Molecular Biology. 2016. V. 62. № 8. P. 45–51.
  9. Патент США. 2006. № 7084262.
  10. Sambrook J., Green M.R. Molecular Cloning: a Laboratory Manual.4th Ed. V. 3. N.Y.: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2012. 1546 p.
  11. Ostman A., Backstrom G., Fong N., Betsholtz C., Wernstedt C., Hellman U. et al. // Growth Factors. 1988. V. 1. № 3. P. 271–281.
  12. Dai M., Yu C., Fang T., Ling F., Wang J., Zhang J. et al. // PLoS One. 2015. V. 10. № 12: e0145419. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0145419
  13. Ersson B., Rydén L., Janson J.-C. Introduction to Protein Purification. In: Protein Purification. / Ed. J.-C. Janson. Canada: John Wiley & Sons, 2011. P. 1–22.
  14. Cytiva Life Sciences. Strategies for Protein Purification: Handbook. UK: Little Chalfont, 2021. P. 41–51.
  15. Sánchez-Trasviña C., Flores-Gatica M., Enriquez-Ochoa D., Rito-Palomarez M., Mayola-Deloisa K. // Front. Bioeng. Biotechnol. 2021. V. 9. https://doi.org/10.3389/fbioe.2021.717326
  16. Huang C.J., Damasceno L.M., Anderson K.A., Zhang S., Old L.J., Batt C.A. // Appl. Microbiol. Biotechnol. 2011. V. 90. № 1. P. 235–247.
  17. Schilling D., Reid J. IV, Hujer A. et al. // Biochem. J. 1998. V. 333. № 3. P. 637–644.
  18. Nieto-Taype M.A., Garcia-Ortega X., Albiol J., Luis Montesinos-Seguí J., Valero F. // Front. Bioeng. Biotechnol. 2020. V. 8. № 632.https://doi.org/10.3389/fbioe.2020.00632
  19. Cos O., Ramón R., Montesinos J.L., Valero F. // Microb. Cell. Fact. 2006. V. 5. № 17. https://doi.org/10.1186/1475-2859-5-17
  20. Rahimi A., Hosseini S., Karimi A., Aghdasinia K., Mianroodi R.A. // Biochem. Eng. J. 2019. V. 141. P. 112–119.

Дополнительные файлы


© А.-А.В. Мистерова, В.А. Чичерин, А.С. Герасимов, 2023